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本制品使用重组蛋白A为配基，具有很高的物理化学稳定性，能够与选定哺乳动物物种的IgG类抗体Fc区相互作用。IgG结合功能在pH值8.2时最佳，但在中性和生理缓冲液(pH值7.0至7.6)也可高效结合。Protein A beads以高度交联的琼脂糖凝胶为基质，可以在相对较高的流速下进行抗体的纯化。蛋白A结合大多数人和小鼠IgG亚类(如人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA；小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3)。它还能结合大鼠IgG1、IgG2c；山羊IgG1、IgG2；绵羊IgG1、IgG2；奶牛IgG1、IgG2；马IgG(ab)、IgG(c)。蛋白A与兔、狗、猫、猪、豚鼠的总IgG有很强的结合力。

本制品可以纯化多种哺乳动物的IgG亚类，用以做免疫沉淀(IP)或者免疫共沉淀(Co-IP)来进行蛋白功能相关研究。也可以直接装在层析柱上来纯化抗体。客户可以从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体，使用方便，应用广泛。

• 洗液/平衡缓冲液：0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH7.0
  
• 洗脱缓冲液：0.1M Glycine Hydrochloride，pH3.0
  
• 中和液：1M Tris-HCl，pH8.5
  
• 储存液：20% ethanol

• 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。确保其含量和pH值与平衡缓冲液一致。
  
• 离心稀释后的样本以沉淀碎片。
  
• 用0.45μm过滤器过滤上清液。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• 本制品含有20%乙醇，使用前请去除。
  
• Protein A琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。
  
• 所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途。

• 将蛋白A凝胶珠装入空柱中。
  
• 用3～5倍柱体积的洗液洗涤色谱柱以去除乙醇，然后用5～10倍柱体积的平衡缓冲液洗涤色谱柱以达到平衡。
  
• 将样品置于室温下，用注射器或泵将样品装入色谱柱。在大多数情况下，样品的总体积并不重要。
  
• 将样品装入柱中，收集流动液体，重复此动作3～5次。如有必要，可重复多次，然后对收集的液体进行合理处理。
  
• 10～15倍柱体积的洗液洗杂Buffer进行清洗，洗液洗涤色谱柱以去除其他蛋白质。直到紫外吸收测到无蛋白流出。
  
• 用洗脱缓冲液洗脱，收集蛋白，收集时用中和液调节其pH。客户可以根据自己的要求测试抗体的相关数据。
  
• 清洗及保存：依次使用3～5倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

• 蛋白抽提
  
  • 从板上刮下细胞，把提取物转移至微量离心管。置于冰上。
    
  • 吸干培养基。添加含有调节因子的新鲜培养基，使其对细胞进行处理一段时间。
    
  • 在非变性条件下收集细胞，去除培养基后用冰预冷的1X PBS洗涤细胞2次。3000转离心3min。
    
  • 去除PBS，每块平板(10cm)加入5～7倍沉淀体积的RIPA裂解液，冰上孵育1小时
    
  • 在冰上进行3次超声破碎，每次5秒。
    
  • 在4℃，10000×g条件下，微量离心10分钟，将上清转移到新管中。上清液即为细胞裂解物。
    
  • 测定裂解物浓度，取出50μL加入上样缓冲液稀释到3mg/mL作为input组，剩余部分进行后续实验。
• 抗体孵育
  
  • 将一抗(按产品说明书中推荐的合适稀释比例配制)加入到浓度为2mg/mL 400μL(即为0.8mg总蛋白)细胞裂解物中。在4℃下，旋转孵育过夜。
    
  • 添加protein A琼脂糖(10～30μL的50%珠浆)，在4℃下，旋转孵育孵育6小时。
    
  • 用TBS洗涤6～8次，最后加入80μL裂解液，4℃孵育30分钟，加入20μL 5X上样缓冲液，沸水浴5分钟，10000转离心10分钟，留上清，进行后续实验。
    
  • 继续使用蛋白免疫印迹法对样品进行分析。